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アイテム
Characterization of a recombinant Bacteroides fragilis sialidase expressed in Escherichia coli
https://kagawa-u.repo.nii.ac.jp/records/344
https://kagawa-u.repo.nii.ac.jp/records/34478110af1-a5cb-465a-956f-d82ccfb4edc4
| 名前 / ファイル | ライセンス | アクション |
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本文 (2.3 MB)
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内容の要旨 (79.4 kB)
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審査の結果の要旨 (408.7 kB)
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| Item type | 学位論文 / Thesis or Dissertation(1) | |||||||||||||
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| 公開日 | 2019-01-30 | |||||||||||||
| タイトル | ||||||||||||||
| タイトル | Characterization of a recombinant Bacteroides fragilis sialidase expressed in Escherichia coli | |||||||||||||
| 言語 | en | |||||||||||||
| 言語 | ||||||||||||||
| 言語 | eng | |||||||||||||
| 資源タイプ | ||||||||||||||
| 資源タイプ識別子 | http://purl.org/coar/resource_type/c_db06 | |||||||||||||
| 資源タイプ | doctoral thesis | |||||||||||||
| アクセス権 | ||||||||||||||
| アクセス権 | open access | |||||||||||||
| アクセス権URI | http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 | |||||||||||||
| 著者 |
山本, 高成
× 山本, 高成
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| 抄録 | ||||||||||||||
| 内容記述タイプ | Abstract | |||||||||||||
| 内容記述 | Abstract The human gut commensal Bacteroides fragilis produces sialidases that remove a terminal sialic acid from host-derived polysaccharides. Sialidase is considered to be involved in B. fragilis infection pathology. A native B. fragilis sialidase has been purified and characterized, and was shown to be post-translationally modified by glycosylation. However, the biochemical properties of recombinant B. fragilis sialidase expressed in a heterologous host remain uncharacterized. In this study, we examined the enzymatic properties of the 60-kDa sialidase NanH1 of B. fragilis YCH46, which was prepared as a recombinant protein (rNanH1) in Escherichia coli. In E. coli rNanH1 was expressed as inclusion bodies, which were separated from soluble proteins to allow solubilization of insoluble rNanH1 in a buffer containing 8 M urea and renaturation in refolding buffer containing 100 mM CaCl2 and 50 mM L-arginine. The specific activity of renatured rNanH1 measured using 4-methylumberiferyl-α-D-N-acetyl neuraminic acid as a substrate was 6.16 μmol/min/mg. The optimal pH of rNanH1 ranged from 5.0 to 5.5. The specific activity of rNanH1 was enhanced in the presence of calcium ions. rNanH1 preferentially hydrolyzed the sialyl α2,8 linkage and cleaved sialic acids from mucin and serum proteins (e.g., fetuin and transferrin) but not from α1-acid glycoprotein, which is similar to the previously observed biochemical properties for a native sialidase purified from B. fragilis SBT3182. The results and methods described in this study will be useful for preparing and characterizing recombinant proteins for other B. fragilis sialidase isoenzymes. |
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| 言語 | en | |||||||||||||
| 学位名 | ||||||||||||||
| 言語 | ja | |||||||||||||
| 学位名 | 博士（医学） | |||||||||||||
| 学位授与機関 | ||||||||||||||
| 識別子Scheme | kakenhi | |||||||||||||
| 識別子 | 16201 | |||||||||||||
| 言語 | ja | |||||||||||||
| 機関名 | 香川大学 | |||||||||||||
| 言語 | en | |||||||||||||
| 機関名 | Kagawa University | |||||||||||||
| 学位授与年月日 | ||||||||||||||
| 学位授与年月日 | 2018-12-26 | |||||||||||||
| 学位授与番号 | ||||||||||||||
| 学位授与番号 | 甲第702号 | |||||||||||||
| 権利 | ||||||||||||||
| 言語 | en | |||||||||||||
| 権利情報 | Copyright © 2018 Elsevier Ltd. All rights reserved. | |||||||||||||
| 権利 | ||||||||||||||
| 言語 | ja | |||||||||||||
| 権利情報 | エルゼビア・ジャパンより、博士論文については、機関リポジトリでの公開可能確認済み。 | |||||||||||||
| 権利 | ||||||||||||||
| 言語 | en | |||||||||||||
| 権利情報 | Elsevier Japan has confirmed the publication possibility in the institutional repository about the doctoral thesis. | |||||||||||||
| 論文ID（NAID） | ||||||||||||||
| 識別子タイプ | NAID | |||||||||||||
| 関連識別子 | 500001323355 | |||||||||||||
| PubMed番号 | ||||||||||||||
| 識別子タイプ | PMID | |||||||||||||
| 関連識別子 | 29432848 | |||||||||||||
| 関連サイト | ||||||||||||||
| 関連タイプ | isVersionOf | |||||||||||||
| 識別子タイプ | DOI | |||||||||||||
| 関連識別子 | https://doi.org/10.1016/j.anaerobe.2018.02.003 | |||||||||||||
| 関連サイト | ||||||||||||||
| 関連タイプ | isIdenticalTo | |||||||||||||
| 識別子タイプ | URI | |||||||||||||
| 関連識別子 | https://dl.ndl.go.jp/pid/11246014 | |||||||||||||
| 著者版フラグ | ||||||||||||||
| 出版タイプ | P | |||||||||||||
| 出版タイプResource | http://purl.org/coar/version/c_fa2ee174bc00049f | |||||||||||||
| キーワード | ||||||||||||||
| 言語 | en | |||||||||||||
| 主題Scheme | Other | |||||||||||||
| 主題 | Bacteroides fragilis | |||||||||||||
| キーワード | ||||||||||||||
| 言語 | en | |||||||||||||
| 主題Scheme | Other | |||||||||||||
| 主題 | Sialidase | |||||||||||||
| キーワード | ||||||||||||||
| 言語 | en | |||||||||||||
| 主題Scheme | Other | |||||||||||||
| 主題 | Sialic acid | |||||||||||||
| キーワード | ||||||||||||||
| 言語 | en | |||||||||||||
| 主題Scheme | Other | |||||||||||||
| 主題 | Sialyl α2,8 linkage | |||||||||||||
| キーワード | ||||||||||||||
| 言語 | en | |||||||||||||
| 主題Scheme | Other | |||||||||||||
| 主題 | Mucin | |||||||||||||
| KEID | ||||||||||||||
| 28573 | ||||||||||||||
